Фармацевты и химики в своей работе сталкиваются со многими встречающимися в природе органическими смесями и смесями химических реакций. Таким образом, система высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) является одним из самых важных инструментов для любой лаборатории. Прибор для ВЭЖХ позволяет разделять и анализировать эти смеси (количественно и качественно). В этом типе колоночной хроматографии размер частиц неподвижной фазы достаточно мал, что затрудняет прохождение через нее растворителя; Чтобы преодолеть это, применяется высокое давление 3000-5000 фунтов на квадратный дюйм. Это наиболее чувствительный, эффективный и точный метод.
Шаги
Шаг 1. Соблюдайте правила и нормы и надевайте фартук
- Очистите ВЭЖХ.
- Включите его и дождитесь начала работы.
- Подготовьте прибор к анализу.
- Храните растворитель / растворители в подвижной фазе в резервуаре для растворителя или лотке для растворителя. Растворитель используется для разделения компонентов смеси. В современных приборах смесь растворителей может использоваться в качестве подвижной фазы, что называется градиентным элюированием. Элюция - это разделение на компоненты.
- В качестве растворителя используйте метанол-вода или хлороформ-гептан и т. Д.
Шаг 2. Выберите типы ВЭЖХ, исходя из относительной полярности фаз:
- Нормальная фаза: используйте сравнительную полярную стационарную фазу, чем подвижную фазу, при проведении ВЭЖХ с нормальной фазой.
- ВЭЖХ с обращенной фазой: используйте менее полярную стационарную фазу по сравнению с подвижной фазой. Обычно используется обратная фаза.
Шаг 3. Введите данные в систему или запрограммируйте ВЭЖХ
- Присвойте номера растворителям, когда вы выбираете градиентное элюирование.
- Укажите скорость потока.
- Отрегулируйте давление насоса.
Шаг 4. Проанализируйте образец
- Добавьте образец в систему инжектора. Это механизм, который вводит образец (разделяемую смесь) в систему.
- Загрузите неподвижную фазу в колонку.
- Запустите ВЭЖХ, нажав кнопку запуска на экране подключенного к нему компьютера.
- Подождите некоторое время, пока смесь не рассыпется на компоненты. Время удерживания - это время, необходимое растворителю для разделения компонентов, которое равно времени, когда вы вводите смесь в колонку, до момента ее обнаружения / анализа.
Шаг 5. Разработайте свои компоненты
Подождите, пока ваша смесь разделится на компоненты. Это называется проявлением, когда детектор обнаруживает содержимое пробы.
Шаг 6. Наблюдайте за результатом
Посмотрите на разделение обнаруженных и записанных на графике компонентов. Будут разные пики, соответствующие компонентам и их концентрации.
Шаг 7. Примените свои выводы к работе
ВЭЖХ широко применяется в фармацевтике, химии и в таких отраслях, как производство продуктов питания. Ниже приведены некоторые из важных приложений.
- Используйте его для качественного анализа, сравнивая время удерживания, наблюдаемое в идентичных условиях.
- Используйте ВЭЖХ для количественного анализа, например для оценки концентрации компонентов.
- Анализируйте разделение липидов.
- Используйте его для ответов в судебно-медицинской экспертизе по уголовным делам и делам об отравлениях.
подсказки
- Используйте подвижную фазу, такую как метанол-вода или ацето-нитрит, для ВЭЖХ с обращенной фазой.
- Для ВЭЖХ с нормальной фазой используйте подвижную фазу, такую как спирт-гептан или хлороформ-гептан.
Предупреждения
- Будьте осторожны при вводе данных в систему; небольшие ошибки полностью изменят результат.
- После каждого анализа запускайте метанол в качестве подвижной фазы, чтобы промыть и ополоснуть ВЭЖХ перед другим анализом.
- В жидкостно-жидкостной ВЭЖХ неподвижная фаза и подвижная фаза не должны смешиваться.
- Перед тем, как покинуть лабораторию, убедитесь, что вы выключили ВЭЖХ.